中国动物传染病学报最新期刊目录
基于反向遗传技术构建表达绿色荧光蛋白的新城疫重组病毒————作者：邱斯薇;侯岳池;张萍;刘昌海;任金莲;陈礼斌;任涛;
摘要：本研究利用反向遗传技术构建了一种表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的新城疫病毒（NDV）Herts/33重组病毒。将EGFP基因插入Herts/33株的P基因和M基因之间，成功拯救了重组病毒rHerts/33-EGFP，并通过血凝效价（HA）和荧光显微镜观察验证其感染性。重组病毒的GFP基因整合通过PCR和测序确认，且在不同感染复数（MOI）下，GFP表达水平与感染剂量呈正相关。生物学特性测定表明...
传染性造血器官坏死病毒RAA-LFD检测方法的建立————作者：李迎新;陈俊贞;高冯思月;刘浩然;马思琪;王雨;李建林;史慧君;付强;徐亚芳;
摘要：为建立一种可现场快速、高效检测传染性造血器官坏死病毒（IHNV）的方法。本研究根据IHNV N基因的保守区域构建质粒并设计特异性引物与探针，结合重组酶介导等温核酸扩增（RAA）与侧流层析试纸条（LFD）技术，通过优化反应条件建立了IHNV的RAA-LFD检测方法，并进行初步应用。结果显示在引物浓度为0.313 μmol/L，温度为37℃条件下反应25 min时可完成核酸扩增，检测下限为1 copi...
江苏南通地区一株GI型猫杯状病毒的分离鉴定与遗传进化分析————作者：赵同舟;刘福康;静争;刘光清;赵兴绪;朱杰;
摘要：猫杯状病毒是一种可以引起猫呼吸道疾病的一种病原，为了研究猫杯状病毒的生物学特性以及遗传进化的规律，我们从江苏南通地区一只疑似猫杯状病毒感染的猫口腔拭子中，成功分离一株猫杯状病毒，命名为FCV NT2023株。首先，本研究利用PCR技术对临床样品进行核酸鉴定，结果发现FCV阳性。随后利用猫肾上皮细胞（CRFK）对该阳性样品进行病毒分离，结果发现接种阳性样品的CRFK细胞出现典型的葡萄串样病变特征。然...
新型H3N2犬流感病毒样颗粒疫苗研制与免疫效果评估————作者：葛杰;赵洪进;王建;刘健;鞠厚斌;杨德全;李鑫;沈海潇;葛菲菲;
摘要：犬流感病毒（CIV）感染的狗较为常发，导致病毒容易发生重排，重排流感病毒存在跨种传播到人类的风险。前期研究结果显示H3N2 CIV出现了新的抗原变异，目前缺少针对变异的H3N2 CIV的疫苗。本研究用重组杆状病毒表达系统制备了H3N2 CIV病毒样颗粒疫苗（VLPs）。通过对HA与NA密码子优化后，其在杆状病毒中表达量明显增强。感染Sf21细胞后以低速离心去除宿主Sf21细胞，上清中VLPs的血凝...
猪流行性腹泻病毒重组腺相关病毒载体疫苗的构建与初步评价————作者：唐国瑞;孟子毅;文晓晓;杨姗姗;王丽丽;李封赛;马增军;芮萍;宋涛;
摘要：猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种急性高传染性的肠道疾病。现有疫苗受自身特性限制在应用中仍存在一定的不足。腺相关病毒（AAV）因其独特的安全性、低免疫原性和持续表达能力，近几年来被广泛应用于动物疫苗的开发。本研究成功表达并纯化出了3种重组腺相关病毒（rAAV）：rAAV-PEDV-S1、rAAV-PEDV-CTD和rAAV-PEDV-NTD，免疫4周龄Balb/c小鼠...
猫细小病毒SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立————作者：葛广宇;陈芷艺;谭雅文;何庆华;
摘要：本研究利用猫细小病毒（FPV）VP2保守区域制备了标准质粒pUC57-VP2，针对该标准质粒建立了SYBR Green I实时荧光定量PCR（qPCR）方法，通过优化反应条件，筛选最佳引物及浓度和退火温度的关键反应参数，显著提升了扩增效率。结果表明，qPCR法最低检出限为4.277×101 copies/μL，能准确识别出FPV目标核酸，与猫杯状病毒、猫冠状病毒、猫疱疹病毒1...
赤羽病病毒Gn杆状病毒表达和单克隆抗体的制备————作者：余儒洋;魏方;王晶晶;陈冬杰;吴绍强;
摘要：为制备针对赤羽病病毒（Akabane virus， AKAV）Gn蛋白的单克隆抗体，本研究将目的蛋白Gn的基因序列构建至pFastBac HTB载体，通过昆虫杆状病毒表达系统（BEVS）制备重组AKAV Gn蛋白。将纯化的重组蛋白免疫小鼠，取其脾细胞和骨髓瘤细胞（SP2/0）进行细胞融合及亚克隆，使用间接ELISA法筛选出能稳定分泌AKAV Gn蛋白的单克隆抗体（mAb）。经过Western Bl...
大肠杆菌-沙门氏菌穿梭型BAC载体的构建————作者：李琳;何可缘;陈磊;姚晓慧;李宗杰;刘珂;邵东华;邱亚峰;魏建超;马志永;李蓓蓓;
摘要：本研究通过对细菌人工染色体（BAC）pBeloBac11的定向改造，构建了克隆大片段DNA的大肠杆菌-沙门氏菌穿梭型BAC载体pBACt3a。通过移除pBeloBac11质粒的氯霉素抗性基因cat，并引入pSC101复制子与营养缺陷型筛选标记asd基因，获得了在大肠杆菌和沙门氏菌中均可在无抗生素压力下，保持稳定遗传的穿梭BAC质粒。同时，基于Red同源重组方法，构建了asd基因缺失型大肠杆菌DH1...
表达ASFV pB602L JEV复制子的构建及鉴定————作者：程星雨;肖长广;周群;李宗杰;邵东华;刘珂;李蓓蓓;魏建超;马志永;邱亚峰;
摘要：鉴于RNA病毒复制子可实现外源抗原基因的高水平表达，本研究选取非洲猪瘟病毒（ASFV）B602L基因，尝试构建表达ASFV pB602L的日本乙型脑炎病毒（JEV）复制子，通过复制子瞬时转染及构建复制缺陷病毒验证复制子的表达情况。首先，对ASFV B602L基因进行密码子优化，将优化后的B602L基因克隆入JEV复制子（pJEV-CMV-EGFP）中，获得复制子pJEV-CMV-pB602L。随后...
病毒挟持外泌体进行免疫逃逸机制研究进展————作者：张嘉家;蔡俊呈;林秋燕;任涛;陈礼斌;
摘要：外泌体作为细胞间通讯关键介质，通过传递核酸、蛋白质等组分参与多种生理病理过程。病毒通过劫持外泌体生物发生及分泌途径促进感染与免疫逃逸。本综述总结其三大作用机制：一是病毒将核酸或完整颗粒包裹于外泌体，借此扩大感染并促进免疫逃逸；二是利用外泌体组分削弱固有免疫；三是依赖宿主ESCRT 系统促进自身出芽及外泌体分泌，协同完成病毒释放与免疫逃逸。尽管外泌体在病毒致病中的核心作用已被揭示，但其与病毒相互作用...
一株鸽圆环病毒的遗传进化分析及其致病性研究————作者：郑嘉雯;张姗;程靖华;谭磊;孙英杰;宋翠萍;廖瑛;唐宁;屈阳;刘惠莉;丁铲;胡顺林;仇旭升;刘秀梵;
摘要：本研究旨在探究一株鸽圆环病毒（PiCV）分离株的基因组遗传变异特征及其致病性。为此，对该病毒进行全基因组测序，并运用DNAStar软件对其基因组、Cap基因以及Rep基因进行核苷酸序列比对分析，并构建系统进化树。使用PiCV病料研磨上清液分别通过口服和肌肉注射两种途径对乳鸽进行感染研究，随后监测攻毒后乳鸽的体重变化情况。攻毒后第7d和第14d各剖杀鸽子3只，选取肝脏、十二指肠、肺脏、胰腺、盲肠、肾...
2021-2023年云南省猪伪狂犬病病毒流行情况调查与病毒分离鉴定————作者：唐佳睿;胡瑜洋;刘雪姣;王艺锦;郑诗玲;管泉源;谭磊;李娟;黄翠琴;
摘要：为初步调查云南省猪伪狂犬病病毒流行情况及流行株基因型，于2021-2023年从云南省部分地区的1025个猪场采集21 238份健康猪群血清样品和1757份疑似感染PRV猪组织样品，选用商业化ELISA试剂盒检测血清样品PRV-gE抗体阳性率，并统计不同年份和季节来源样品阳性率；采用qPCR法检测组织样品中PRV核酸，从阳性病料中分离获得病毒，初步探究其生物学特性。结果发现，71个猪场的893份血清...
基于酵母转化重组的猪德尔塔冠状病毒反向遗传系统的构建————作者：孙琳舒;程群;刘甜;杨心雨;秦文珍;孔宁;单同领;李有文;
摘要：猪德尔塔冠状病毒（Porcinedeltacoronavirus，PDCoV）是一种新型猪肠道冠状病毒，感染仔猪后可引起腹泻、呕吐、死亡等临床症状，是影响养猪业发展的重要病原之一。然而，由于冠状病毒基因组庞大，在大肠杆菌中复制不稳定，构建冠状病毒感染性克隆仍是一个难题。为了克服这一难题，我们利用基于酵母转化体外重组的反向遗传操作系统构建了PDCoV 的感染性克隆。拯救出的病毒在体外具有与野生型病毒...
炭疽杆菌微滴数字PCR检测方法的建立与初步应用————作者：姜子昕;薛瑞雪;邢林林;胡莉萍;蒋文夺;李俊华;兰邹然;张月;
摘要：本研究旨在建立一种炭疽杆菌的痕量检测方法，可应用于突发炭疽疫情、流行病学调查以及公共卫生事件的早期、快速、精准诊断。通过设计并合成针对炭疽杆菌pXO2基因的引物对与荧光标记探针，构建质粒标准品，系统优化探针与引物浓度、反应体系试剂组分等关键参数，成功建立了可检测炭疽杆菌pXO2基因的微滴数字PCR方法。对该方法的灵敏度与特异性进行测试，并将其应用于实际检测场景。结果显示，微滴数字PCR检测炭疽杆菌...
我国部分地区鹅星状病毒基因组序列及遗传进化分析————作者：李杰;胡峰;于可响;吕俊峰;刘丽萍;黄兵;马秀丽;秦卓明;李玉峰;王建琳;
摘要：鹅星状病毒（GAstV）是造成雏鹅痛风的主要病原，但是目前对其流行情况及其遗传进化及变异规律了解甚少。本实验从我国不同地区采集病料，进行病原鉴定、全基因组测序、遗传进化分析。结果显示，获得的10株GAstV全基因组核苷酸序列同源性为97.1%～99.9%。通过全基因组以及3个阅读框遗传进化分析显示10株GAstV均为GAstV-2-Ⅱ-c亚型，与我国2019年以后流行的鹅星状病毒基因亚型基本一致。...
大肠杆菌表达的重组猪源G-CSF在小鼠上的生物学活性分析————作者：刘丽萍;刘云;虞凌雪;李国新;倪迎冬;
摘要：粒细胞集落刺激因子（G-CSF）是一种多肽类生长因子，其主要作用是促使大量骨髓前体细胞的动员。G-CSF 具有良好的生物活性，被广泛用于免疫学研究。在本研究中，通过对猪源粒细胞集落刺激因子（PG-CSF）基因进行密码子优化，构建了重组质粒pColdI-PG-CSF。将pColdI-PG-CSF转染到大肠杆菌BL21（DE3）中，用 IPTG诱导重组猪粒细胞集落刺激因子的表达并纯化。SDS-PAGE...
稳定表达PEDV N蛋白的Vero细胞系和PK1细胞系的构建————作者：刘甜;程群;孙琳舒;杨心雨;秦文珍;孔宁;单同领;李有文;
摘要：为深入研究猪流行性腹泻病毒（PEDV）核衣壳（N）蛋白的生物学特性，以及建立反向遗传操作平台，本研究成功构建了稳定表达PEDVN蛋白的非洲绿猴肾细胞（Vero）系和猪肾细胞（PK1）系。本研究将PEDVN基因克隆至慢病毒载体pLVX-EF1a-IRES-Puro，通过同源重组法获得重组质粒pLVX-PEDV-N，利用慢病毒包装系统包装出能够表达PEDVN蛋白的慢病毒颗粒，然后分别感染Vero和 P...
一株C亚型禽偏肺病毒的分离、鉴定和致病性研究————作者：宋晓飞;李振;王磊;彭建云;汪建华;许明清;郑蕊蕊;赵妮;贾爱琴;刘华春;张连秀;
摘要：为了研究我国部分白羽肉种鸭和蛋鸭产蛋下降是否与禽偏肺病毒有关，我们从山东、江苏、内蒙古等地的发病鸭场采集病料，进行了病毒分离鉴定、透射电镜观察、全基因组测序、遗传进化树分析和致病力试验。结果显示：成功分离出一株禽偏肺病毒，接种Vero细胞、BHK细胞、DF1细胞后出现细胞病变（CPE）。测序分析该病毒全基因组全长14 152 bp，遗传进化分析表明为C亚型禽偏肺病毒。动物试验结果表明，3周龄SPF...
枝睾阔盘吸虫FABP基因的原核表达及多克隆抗体制备————作者：李闻静;苗壮;周芳芳;孙淑雯;李芬;
摘要：对枝睾阔盘吸虫（Eurytremacladorchis）的脂肪酸结合蛋白（FABP）进行原核表达与鉴定，并制备鼠抗EcFABP多克隆抗体。方法 通过PCR技术扩增了含开放阅读框（ORF）的EcFABP序列，构建重组表达质粒pET-28a-EcFABP。IPTG诱导EcFABP重组蛋白表达并进行最佳诱导时间优化。将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂等比例乳化后免疫BALB/c小鼠，制备多克隆抗体，经ELIS...
禽流感病毒H1N1亚型NA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定————作者：吕雪华;牛世奇;潘晟辉;张云翔;潘学;张志飞;许榜丰;闫鸣昊;闫大为;滕巧泱;苑纯秀;李泽君;刘芹防;
摘要：流感病毒是分节段的负链RNA病毒，高致病性禽流感病毒可导致严重的致死性疾病，已给全球禽类养殖及相关产业造成了巨大损失，并对人类健康造成了极大威胁，流感病毒表面的NA蛋白与流感病毒的功能息息相关，NA蛋白由RNA片段6编码，NA蛋白的主要作用是在新生病毒粒子从细胞膜表面出芽的阶段切割病毒和细胞膜糖蛋白的SA结合以避免病毒粒子的聚集从而从被感染细胞表面释放。为获得NA单克隆抗体为后续实验提供帮助，本实...
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